《敢死队》的故事设定在抗日战争初期的南京。作为国军中校的马烽（宋佳伦饰），肩负着秘密组建“025敢死队”的重任，这支队伍的任务是深入敌后，对日军进行精准打击。马烽从即将处决的犯人中精挑细选了五位极具特殊技能和背景的成员：麻老五（韩童生饰），前苏联军械专家；徐飞虎（杨猛饰），经验丰富的中情局特工；唐人杰（郭铁城饰），身手不凡的窃贼高手；强大龙（铁鹤饰），力大无穷的武术高手；朱大山（未提及演员），同样拥有特殊技能。在一系列紧张而激烈的行动中，他们成功营救了两名珍贵的美国援华医生，并保护了他们手中至关重要的南京大屠杀证据胶片。随后，“025敢死队”又完成了一项关键任务：刺杀日军驻南京最高指挥官熊本连太郎（未提及演员），并成功夺取象征着国家尊严的传国玉玺。最终，面对日军高层会议的严峻挑战，这支英勇无畏的小队决定以命相搏，为逝去的三十万同胞寻求最后的复仇与解脱。
